血药浓度分析仪应用--单抗药物血药浓度定量检测案例分享
药代动力学（PK）是一门定量研究药物在生物体内的吸收、分布、代谢和排泄规律，并用数学原理和方法解释血液药物浓度随时间变化规律的学科。血液是药物及其代谢产物在体内吸收、分布、代谢和排泄的介质。药物在各种体液和组织中的浓度与血液中药物浓度保持一定的比例关系。是最常用的样本。为了便于抗体药物的临床前和临床药动学研究，设计一种准确的实验方法测定血药浓度显得尤为重要。
目前最常用的单克隆抗体浓度测定技术是酶联免疫吸附试验（ELISA）。本文将介绍三种最具代表性的ELISA方法。
三种单克隆抗体血药浓度定量检测方法的优缺点比较（以PD-1抗体为例）：
病例一：间接法测定PD-1抗体血药浓度
检测方法：ELISA
测试设备：BMG单簧管微型读板器
样本信息：PD-1抗体血清样本
主要试剂：
人PD-1蛋白（顶生系统，猫。不.PD1-H5221）
过氧化物酶亲和山羊抗人IgG，Fcγ片段特异性（Jackson，猫。不.109-035-098号）
简要流程：
一。覆盖人PD-1（，猫。不.PD1-H5221），浓度为0.1ug/孔，置于板上；
2。将PD-1抗体药物稀释到人血清中；
三。将稀释后的PD-1抗体药物加入孔板；
四。添加过氧化物酶亲和山羊抗人IgG二级抗体；
5个。彩色显影。
测试结果：
为避免非特异性背景干扰，本法血清样品稀释1000倍，血清样品检测范围为0.19-6.25ug/mL，检测灵敏度为0.19ug/mL（见图1）。
图1。间接法测定血浆PD-1抗体浓度的标准曲线
病例2：抗体竞争法测定PD-1抗体血药浓度
检测方法：ELISA
测试设备：BMG单簧管微型读板器
样本信息：PD-1抗体血清样本
主要试剂：人血清抗PD-1H-mAb酶联免疫吸附测定试剂盒（ACROBiosystems，猫。不.EPH-V1）
简要流程：
将人PD-1以0.1ug/孔的浓度涂于板上；
将梯度稀释的PD-1抗体药物与生物素化抗PD-1抗体混合（最终血清浓度10%）；
将混合物加入孔板；
加入链霉亲和素蛋白、HRP二级抗体；
彩色显影。
测试结果：
本法血清样品检测范围为0.78-25ug/mL，检测灵敏度为0.78ug/mL（见图2）。
图2。抗体竞争法测定PD-1抗体血药浓度的标准曲线
例3：配体竞争法测定PD-1抗体药物血药浓度
检测方法：ELISA
测试设备：BMG单簧管微型读板器
样本信息：PD-1抗体血清样本
主要试剂：
人PD-L1蛋白（顶生系统，猫。编号：PD1-H5258）
生物素化人PD-1（顶生系统，猫。不.PD1-H82F2）
链霉亲和素蛋白，HRP（热，猫。编号21126）
简要流程：
覆盖人PD-L1（，猫。不.PD1-h558），浓度为0.2ug/孔，置于板上；
2。将梯度稀释的PD-1抗体药物与生物素化人PD-1（最终血清浓度10%）混合；
三。将混合物加入孔板；
四。加入链霉亲和素蛋白、HRP二级抗体；
5个。彩色显影。
测试结果：
本方法血清样品的检测范围为1.565-6.25ug/mL，检测灵敏度为1.565ug/mL（见图3）。
图3。站立
配体竞争法测定PD-1抗体血浆浓度的ard曲线
案例分析比较：
图4。间接法与抗体竞争法检测不同人群给药前血清中PD-1抗体浓度的比较。
比较以上三种情况，三配体竞争法线性范围窄，样品稀释繁琐，准确度低。与病例二抗体竞争法相比，病例一的间接法线性范围相似，灵敏度相近。然而，病例1间接法中使用的二级抗体是山羊抗人IgG，血清中会有非特异性背景干扰，而病例2抗体竞争法使用链霉亲和素蛋白、HRP结合生物素作为二级抗体检测背景干扰（见图4）。
血药浓度分析仪应用--单抗药物血药浓度定量检测案例分享
为了支持上述研究，，采用病例2的抗体竞争法测定临床前和临床血液样本中的抗体浓度。该系列产品具有低背景、通用速度、高批量一致性等优良的实验性能。
特征
低背景
由于血清背景干扰，可能产生假阳性结果，因此确定最小稀释因子（MDR）具有重要意义。在实验过程中，需要用缓冲液对样品进行稀释，使实验结果达到最佳精度，消除基体干扰。在间接ELISA中，血清需要稀释1000倍以消除假阳性。为了避免过度稀释引起的错误，使用一系列生物素标记的抗体来减少血清非特异性干扰引起的假阳性。
通用快速
在PD-1血药浓度检测试剂盒中，我们成功地验证了5种已上市或处于临床阶段的治疗性PD1抗体。
PD-1血药浓度检测试剂盒验证了5种治疗性PD-1抗体。
我们使用生物素化抗体来检测血液样本抗体药物的治疗是受到特定竞争的，这避免了常规夹心法所必需的抗体药物ADA的发展，大大缩短了血液药物浓度分析方法的建立周期。
高批量一致性
我们有严格的质量控制措施，以确保产品批次之间的一致性。新产品将通过各种实验方法与我们的内部标准进行比较。只有差异在可接受范围内的产品才会放行。
高稳定性
为了保证产品的稳定性，ACROBiosystems将进行加速实验、冻融实验和长期稳定性实验来验证产品的稳定性。只有经过测试和确认对质量和活动没有影响的产品才会发布。
按照说明书对PD-1血药浓度检测试剂盒的组成成分进行改造后，放置于37℃下2小时，活性无明显差异。根据加速试验的换算方法，产品可在-80℃放置4.6个月。
按照说明书对PD-1血药浓度检测试剂盒的成分进行重组后，冻融循环重复1-2次，活性无明显差异。
通用（深圳）仪器有限公司是专业生产液相色谱仪和离子色谱仪的厂家，主要产品有：全自动二维液相色谱仪（血药浓度检测），全自动二维离子色谱仪（血药浓度--碳酸锂专用），专用离子色谱仪--糖专用测试仪，通用离子色谱仪，在线离子色谱仪-电厂水质监测，液相色谱互动教学系统，通用液相色谱仪等.