高效液相色谱法测定三聚氰胺
2020-06-27 08:43:52
高效液相色谱法测定鸡蛋中的三聚氰胺
摘 要：建立采用固相萃取净化，高效液相色谱法测定鸡蛋中三聚氰胺含量的方法。样品采用三氯乙酸和乙酸铅溶液提取，优化样品提取时间、色谱柱及固相萃取柱，最终确定为样品提取20min、采用TC-C18(4.6mm× 150mm，5μm)色谱柱和PCX 固相萃取柱。采用紫外检测器，检测波长为240nm，流动相为乙腈:辛烷磺酸钠- 柠檬酸缓冲液(10:90，V/V)，流速1.0mL/min，进样量20μL，外标法定量。三聚氰胺在1～50μg/mL 范围内，具有良好的线性关系(R2=1)，在添加质量浓度为5～20mg/kg 范围内，三聚氰胺添加回收率在72.8%～87.6%，RSD(n=6)为1.5%～4.0%，最低检测限为0.54mg/kg。
三聚氰胺(melamine)简称三胺，学名三氨三嗪，别名蜜氨、氰尿酰胺、三聚酰胺，微溶于水及乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳。在一般情况下较稳定，但在高温下可能会分解放出氰化物[1]。三聚氰胺的含氮量为66.6%，折合粗蛋白含量为416.27%，因此，不法商贩将其掺入蛋白性饲料或食品中提高蛋白质测定含量，降低成本。有人估算在植物蛋白粉和饲料中使测试蛋白质含量增加一个百分点，用三聚氰胺的花费只有真实蛋白原料的1/5。三聚氰胺对哺乳动物低毒，但长期吸收到体内，会导致体重降低、膀胱结石、结晶尿症。世界卫生组织(WHO)[2]报道，因为三聚氰胺容易和人体内氰脲酸(即三聚氰酸)反应生成晶体状聚合物，而引起结石等病状，严重影响人类健康。2007 年3 月中旬以来，美国发生了宠物食品三聚氰胺污染事件，2008 年国内发生了三鹿奶粉事件，且在出口香港的鸡蛋中也检测出了三聚氰胺，因此，建立和完善饲料和食品中的三聚氰胺的检测方法，势在必行。目前针对饲料和牛奶中三聚氰胺的测定我国农业部和国家质检总局先后于2007 年法包括高效液相色谱法、气相色谱- 质谱法( g a s chromatogrophy-mass spectrometry，GC-MS)、液相色谱- 串联质谱法( l i q u i d c h r om a t o g r a p h y -m a s s spectrometry，LC-MS/MS)等。但是饲料和食品的其他不同基质的相应测试方法的国家标准和地方标准还没有出台，鸡蛋中三聚氰胺的测定方法，亦未见标准出台。目前，针对饲料和食品不同基质的测定方法已见报道。Wang 等[5]采用酶联免疫法测定猪、鸡组织及体液中的三聚氰胺，针对液态奶、奶粉、饮料等食品以及鱼、鸡、猪组织等动物性食品，人尿液、小鼠血浆、组织中的三聚氰胺的测定不同学者[6-11]建立了LC-MS/MS法，对于鸡蛋中三聚氰胺的检测方法，陈义强等[12]建立了气相色谱- 质谱法；Xia 等[13]建立GC-MS/MS 与UPLCMS/MS(ultra performance liquid chromatography-mass spectrometry)法，Xu 等[14]通过应用新型离子交换树脂净化鸡蛋建立了LC-MS/MS 法，Chou 等[15]采用高效液相色谱法测定了禽肉、蛋中的杀虫剂及其代谢物三聚氰胺，并采用GC-MS 法确证。GC-MS/MS、LC-MS/MS与HPLC 相比灵敏度高、选择性好，但GC-MS 需要衍生化，过程比较繁琐，且前两种方法成本高仪器设备昂贵，一般作为确证的方法，而高效液相色谱法由于无需衍生化成本低且仪器设备较普及是目前最为常用的检测方法和初筛方法。本实验主要在农业部行业标准NY/T1372 — 2007《饲料中三聚氰胺的测定》[3]的基础上，通过比较不同类型的色谱柱、固相萃取柱和样品提取时间建立鸡蛋中三聚氰胺的高效液相色谱检测方法，并采用LC-MS/MS 法确证。同时，应用紫外光谱对不同浓度的三聚氰胺标准品进行最大波长扫描，并测定三聚氰胺的总能，为全面了解三聚氰胺的性质提供基础数据。